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摘要: 目的制备地高辛标记的HCV核心区RNA探针,用于筛选与丙型肝炎病毒(HCV)RNA核心区结合的细胞蛋白质分子。方法采用RT-PCR方法,从HCV感染者血清中扩增HCV C区cDNA序列,将所得序列克隆入载体PinpointT-MT Vector和pGEM-7EF(+)Vector,进行PCR、酶切和测序鉴定。以HCV-pGEM-7EF(+)中的HCV核心区cDNA序列作为体外转录RNA的模板,经T7 RNA聚合酶转录得到地高辛标记的HCV核心区RNA探针。将地高辛标记的探针用于紫外交联实验,筛选HepG2细胞中可与HCV RNA结合的蛋白质分子。结果所得HCV核心区cDNA序列为503 bp。地高辛标记的HCV核心区探针初步筛选到两个与HCV RNA结合的蛋白。结论地高辛标记的HCV核心区RNA探针具有较高的特异性和敏感性,可用于筛选与HCV RNA结合的细胞蛋白质分子。
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