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一株新蛋白磷酸酶基因(Sy2)的原核表达载体构建及鉴定

马广文 陈兵 鲁云霞 李菲菲 倪芳 郑红 汪思应

马广文, 陈兵, 鲁云霞, 李菲菲, 倪芳, 郑红, 汪思应. 一株新蛋白磷酸酶基因(Sy2)的原核表达载体构建及鉴定[J]. 中华疾病控制杂志, 2006, 10(4): 339-342.
引用本文: 马广文, 陈兵, 鲁云霞, 李菲菲, 倪芳, 郑红, 汪思应. 一株新蛋白磷酸酶基因(Sy2)的原核表达载体构建及鉴定[J]. 中华疾病控制杂志, 2006, 10(4): 339-342.

一株新蛋白磷酸酶基因(Sy2)的原核表达载体构建及鉴定

基金项目: 国家自然科学基金(30572206); 安徽省自然科学基金(00044202,No01043709); 安徽省人才开发基金(2002Z035);
详细信息
  • 中图分类号: R346

  • 摘要: 目的用含有人Sy2酪氨酸磷酸酶基因的pOTB7质粒,构建Sy2原核表达重组子,并用该重组子转化原核细胞,表达出含Sy2的融合蛋白,为将来以此融合蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,进一步研究该基因的功能打好基础。方法用PCR扩增Sy2的PP2C结构域序列,限制性内切酶双酶切,构建到表达载体pET28a(+)中,酶切、测序等鉴定后,重组子pET28a(+)-Sy2转染原核细胞,用载体标签His抗体经SDS-PAGE、Western blot方法检测Sy2重组蛋白的表达。结果成功构建出pET28a(+)-Sy2重组质粒,Western blot方法检测出融合蛋白的表达。结论成功构建原核表达载体并在原核细胞中表达成包涵体,这种包涵体可以作为抗原制备Sy2的单克隆抗体。
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